PDF《医学研 究所.》

I g― I 第 T卷第 2期1092年6月 中国毒学V| ROLOGI CA SI NI C^ _ } V0I .

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2 J un.

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9 2 AB C - E L I S A检测抗 HBc的 方法 及其在 I 临床和流行病学中的初步应用 江 克庆 ( 海军医学研究所.上海200433)4年・6/提要应用生 物 素与 抗 生物 素系统酶 联免疫吸附试 验建立了检 测 乙型 病毒 性肝炎患者血清中抗HB e的AB C ― EL I S A方 法并 与 普通 E LI S A 法进 行了比较 . 结果 表明:本 法敏 感性 较普通ELISA法高 4倍,阳性 拴 出率提 高了北.42曲,且 具有较好的重复 性. 将乙肝不 同抗原、抗体 进行替代试验和 用纯化抗HB e ― l g G进行抑制试验.证明本诖有较高的特 异性.将本诖 制备 成试剂盘, 并 与上 海市 传染病院,静华公 司及科华公 司生 产 的普 通ELISA试剂盒进行了比较 , 结 果本 试剂盒阳性检 出率 分别提高了2s.O0啊,4

5 .

2 8畴和

3 0 .

7 7畴. 经上 海市 三个医院临 床 标本 试 验表 明 ,本 法具有快速、敏 感、特异 及稳 定等优点.从而 为抗HB c 的捡'

劂提 供了一种 敏感的方法. 定 等重要指标. 抗HB e的检测方法 ,国内1

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2 年建立 了尸 肝HB c Ag的普通ELISA方 法…. 由于用尸 肝制备 HB c Ag 来 源困难,影响了方法的推广应用.1

9 8 3年, 国内大 肠 杆菌 克隆化 HB e Ag问世,并能用发酵罐大量生产 ,从而为 抗HB c 检1冽提 供了关键试剂.但 至今 未见国内将 A BC ― E L

1 S A法用于抗HB e检测的报告.现将我们建立 A B C ― E L I S A检测抗 HB c的方 法及 结果介绍如下 . 一材料与方法

一、材料1.大 脑杆苗克隆 化HB c Ag南京军事医学 研 究所 提供;

2 .抗HB c 一[gG从 商效价(1: t

0 0 万)抗HB c阳 性寤 人血 清 中提 取 ,经 DE A E― C e l l u l o s e纯化;

3.生 物素(B i o t i n ) 为 日本 产品;

4 .Bi o t i n 一抗HB c ― I g G 由本 室制备;

5 .抗生物素蛋 白( Av i d i n ) 由本 室 制备 ,从鸡蛋清中提取,活 性为12u/mg ;

6.抗生 物 素蛋 白一 生物素化酶 复合物(AB C)由本 室翩备.步 骤如下: (

1 ) 生物素化 酶的制备用0.1mo l / L Na HC O

3 溶液 将HRP配成

1 mg / ml 浓度, 生物 素 N羟基 T 二酰 亚胺酯( B N HS ) 用二甲基 甲酰胺 溶解,浓度 为2Omg / ml ,在lm1 酶溶液中加2 s l BN HS 溶液 ,3

7 ℃ 本 文于

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9 1 年 5月 2日收到,

1 0 月3

0 日修回.

1 N=l m~ l / L*离 子价数 维普资讯 http://www.cqvip.com 第2期江克庆等:A B c ― E L I S A 缝测抗H B c 的方法蔑在临床帮流行扁学中的初步应用

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9 中反 应30分钟然后 在4 ℃ 中对 P B S透析2

4 小时,其间换 液 4提 ;

(

2 ) ^B c 复台物的制备 将Av i d i n 与 生物 素化酶阻i;

2 的比佣相混合,室温中静置2O分 钟 .印 成ABC (Av i d i n ― HRP ― B i o t i n c . mp l e x)o 在0.5ug/ml抗人IgG-Bio包 被板上作两者配 比浓度滴定,其 S / N值最大时的^idin和HRP ― Bi o浓度为两者适宜的配比浓 度 ,实 验时 的两者配比浓 度一 般各为0.5ug/ml耜lug/ml ,AB C的 贮存 液可配成 0.

2 5 mg / ml和0.5mg / ml .

二、括测方法在40孔反 应板孔中先 用抗HB c ― I g G 包被,每 孔0.1ml ,置4℃过夜,洗3趺.加适 当稀 释的HB c Ag ,

3 7 ℃ 2小时,诜 3次 ,加被 控 血清 (1 t

1 0 0稀释)每 孔0.im1,随后每孔 再 加入 适 当稀 释的 Bi o t i n标记抗HB e ― I g G

0 .

1 ml ,3

7 ℃

3 0 分钟,洗 4次 ,加 AB C复台物3 '