PDF《杆 状病 毒增效蛋 白研 究进 展》

2 0 ~1

2 0氨基酸 间的D、 H、 c、 E中 的任 一氨 基 酸残基 络合. 比较 4种增效蛋 白的氨基酸 序列发 现,在HE X XH 下游

2 0 ~1

2 0位之 间有 两个 E残基和 两个 D残基 非 常保 守.其中任何 一个氨基酸 残 基都 可与zn2结合. 在 金属 蛋 白酶 HEX XH序 列中, E残 基作为催化基 团, 使一个水分子极 性化亲 核攻 击肽链 上 的肽键 并使 之断裂.1

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6 年.Lep0re等n

0 ) 证明TnGV的增效蛋 白是一个 金 属蛋 白酶 , 能降 解 昆虫 中肠 ( 围食 膜)的粘蛋 白. 由此 推测 , 其它两种 G V和LdMNP V 的增效 蛋 白可 能主要 是 以金属 蛋 白酶 形式起增效作 用的.这也 就很容易解释 为什么 T n G V增教 蛋 白对 B t 伴孢晶体 和B一外毒索等 也有增效作用.增效蛋 白的另一个 显著 特 点是有 丰富的 可能 的糖 基化序列―― NxS / T.L d MNP V 有9个, T n G V有12个 , P u G V有l1个,HaGV有 7个 .这些 可能的糖基化 位点在 G V增效蛋 白序 列中表现 出极 大的位置 保守性 , 而TnGV、 P u GV中 的保 守性 更大 ( 见表

2 ) , 说 明这些 可能 的糖 基化位点对增 效蛋 白的活性是 不 可缺 少的.L d MNP V增 效蛋 白可能 的 糖基 化 位点 与GV 的不同.但 有两个可 能的糖基化位 点距 HE X XH 下游的相对 位置 极相似 , . 由此推断 . 这 两个位 点 的糖基化 可能对增效 蛋 白的功能 是很 重要的 . 衰24种增效 蛋 白中可 能 的基化 位 点比较 Ta bl e

2 The p o t e nt i a l g l

3 ~o s y l a t i o n s i t ~ s i n t h e p e p f id e s of t h e[ ou r e n h e nc l n s 注:距HEXXH上游 的相 对 位置用 负号 表示 , 下游 的相 对位置 用 正号 表示 . 增效蛋 白的第三个 显著特点是 含有 丰 富的酸性 氨 基酸, 4种增 效蛋白中酸性 氨基酸占 总氨基酸百分数分别为:LdMNP V

1 9 .

5 6 % 、 Tn GV

2 0 .

6 0 % 、 P u G V

2 t .

4 2 %、 Ha GV

2 2 .

2 8%, 平均为20.97%. 而碱性氨基酸所占的百分数较低. 依次为l1.25%、l

1 .

4 3%、5 .

4 3 % 和1241%, 平均 为1O13%.增效蛋 白的氨 基酸组 成也 很 相似 , 推 测它 可能由同一个 共同的基 因进 化而来.综上 所述 , 无论从基 因结构还是氨 基酸序列 , L d MNP V与GV的增效 蛋 白都 极 其相似 , 那 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第14卷 么,LdMNP V 中增效 蛋 白的来源便是 一个很 有趣 的 问题.我 们从 现有 的 资料推 测.LdMNP V 的增效 蛋 白基 因很 可能来 自GV, 是MNP V与GV在 自然状 态下基 因重组 的产物 .其原 因是 : 第一 , 迄今所 知. 杆状病 毒增效 蛋 白在 G V 中存在较 MN P V 中普遍 , 无疑 G V 的基 因组是增 效蛋白的天 然基 因库 ;

第二 , L d MNP V 增效蛋 白基 因结构 与GV增 效蛋 白基因结构 极 其相似 . 没有MNP V 中已知基 因的特 征结 构;

第三 , L d MNP V 增效 蛋 白与 GV增 效蛋 白有 较大的同源 性.有共 同的酶活性 中心 , 而与已知 的其它 蛋 白问没有任何 同源性 [

1 , 推测 它不是 MN P V 中普遍存在的成 分.3增效 蛋 白在害虫防治 上应用的展望 增效 蛋 白因 能增 加 多种 NP V 对 昆虫 的感 染力而倍 受关注, 纯化的TnGV增效蛋白与 Ac MNP V一同饲喂 T. n i幼虫时. 能使 Ac MNPV对甜 菜夜蛾 ( . S p o d o p t e r a ) 感染力提 高12倍 【 ;

与Bt混合 使用, 能使 B t 毒力提高

2 ~7倍【 t

0 l .因此 , 增 效蛋 白在提 高杆状病 毒杀 虫效 率和拓宽 害虫综合 防治的领域 显示 出诱 人的前景.上 面所述 两种 增效机理 , 对MNP V 的 增效作用 二者兼 有.对Bt等其它杀虫剂 的增 效作 用可能主要 以第一种方式 起作 用.这就使 增效蛋白的增效作 用扩展到杆状病 毒 以外, 使其 应用 范围更 加广 阔.B i e h o f f [ 引等人通 过缺失突 变LdMNP V增 效蛋 白基 因证 明,增效蛋 白只增加 MNP V 的感 染力, 并 不增 加杀 虫速度 .增效蛋白的双重作用机制 , 在实践 上有极 大 的应 用价值 . 首先 , 可 以将增教 蛋 白基 因重组在 A e MN P V 等广谱 MNP V 中, 生产 广谱 高效的重 组病毒.L d MN P V增效 蛋白基 因 的发 现, 使这 一 可能 性变为现 实,说明将增 效蛋白基 因重 组到MNP V 中表 达 生效 是 可行 的、 有效的.我 们认 为.MNP V 的P10基 因位点 是理想的插入位 点[