PDF《玉米矮 花叶病》

q 弓一第7巷第

1 期1992年3月 中国病毒学VI ROLOGI CA SI NI CA ≥ 寺fz()Vo1 .

7 N o.

1 M a r.

1 9

9 玉米矮 花叶病毒提纯及特性 的研 究陈b-10周广和 、 陈剑波一V(中国农 业科 学院植 物保 护研 究所 .北京100994) 提要S年

2 . } 改进宿毒 纯 化方 法 ,获得 了 较高 纯度.较 强侵染活性 的提 纯病 毒制品. 提 纯病 毒的产量为

0 .

7 一1.2rag / l O O g扁叶.病 毒粒 体 大小 为720―7 s O X

1 4 n m, S DS - 聚丙聋旨酰胺 凝胶电泳 涮 得的 外壳蛋白分 子量 为35000道尔顿,用 提 纯病 毒免 疫家鬼得到较高 特异 性的抗血清,微 量沉淀反应 的效价为1/2048间接ELI$A法 谢 出韵 感病叶汁液的最 高稀 释倍 数为32flfl--6 ~

0 9 倍. 关键调:玉米矮花叶病毒纠裔、黜玉米 矮花叶病

1 9

6 2年首先 在美 国发 现,

1 9

6 3年 明确 由玉 米矮花叶 病毒 (Ma i z e Dw a r f Mo s ~ i c Vi r u s ,简称 MDMV)侵染所 致1.目前,世 界上凡种植 玉米 高梁等 作 物的国家 和地区均有不同程度 的发生,对 玉米 、高梁 的生 产造 成严重危害 .各国对 这一世界性 的病毒病害十分 重视,进行 了大量 的研究工作 . 玉米矮 花叶病在 我国发生也很严 重,不少 单位 已对 此病进行 了研究 , 但研究 多 集中在流行规律 、寄主 范围、抗性遗传 、筛选抗 原和选育抗病 品种等方面 ,对病毒 的研 究较少.材料与方法

一、材料 来潭:用 于 病毒 提纯的毒 源材 料是1988年 采 自本 所 玉米 地中呈典型玉米矮花叶病 状的病叶, 经鉴 定为玉米 矮花叶病毒 感染. 病叶冻存 于一7

9 C冰箱中己达一 年,摩擦 法接种玉米 感病品种黄 早 四的 三叶期健 苗,l0夭左右新叶片 出 现典 型花叶症 状 .表 明病 毒仍具话性o = 、| 胄摄鲔曩薹 特性:1.提纯程 序:1009克球冻病叶.加4倍 体积的0.OSmo l / L磷酸 缓冲液,pH7 . 0( 下称缓 冲液)内含0.

0 l mo l / L D I E C A, 高速捣碎3l订钟 后,用四层纱 布过滤,蟪液中加入20四氯 化碳 , 眯搭条件下剧烈 搅拌2

0 分钟 ,以充分乳化,7

0 o o r / m 离心 l 5分钟,取 上 层水 相 ,按 w/ V比加入6知PE G, 1. 8帅Na CI. 0. s 睁Tr i t o nX -

1 6

9 .冰搭条件下搅 拌溶解,4 ℃ 眯箱中静 置过夜,次 日取 出 ,以

7 0

0 0 r / m离心15分钟 . 留沉 淀 .按原 计 液体 积的1 /

1 0 加入缓冲液,内 含 3睁Tr i t o n X一100,0 .

1 帕巯基 乙静,冰 浴条阵下搅 拌 】小 对 ,使 沉淀 克分溶解,然后 以8O0Or/m离心1s分钟 , 取上清,955OOg离心本文于1

9 9

0 年1

2 月朗目收到,1

9 9

1 年 6月2

1 曰修回. 维普资讯 http://www.cqvip.com

9 4 中国蒴毒学曩T卷

9 0 分钟.弃 上清留沉 淀.将沉淀用原体 积1/lO的缓冲 液充 分悬浮,8

0 0

0 r / m 离心15分钟 . 取上清,以30徭蔗糖 垫底 ,1

1 3

0 0

0 g离心2 .

5 小时,取 沉淀,用 原 悻识

1 /

1 0 的缓冲液 悬浮,8000r/m离心10分钟,得到的上清 随即为初步提纯病毒液.进一步 纯 化采 用蔗糖硫酸铯不连 续密度梯离心接 ¨ ¨. 上 层梯 度为

3 0师蔗糖 溶液,以 下依 次 为含

0 .

4 t oo l / L、0 .

8 t oo l / L

1 .

2 m o l / L硫酸 铯的30师蔗 糖溶液,在 此梯 度上加入

1 .

0 ml初提纯病毒液后立即咀114S00g离 心 2小 时,吸取病 毒带,用 缓冲渍稀释 后加PEG沉淀病 毒,然后 用缓冲液 将病 毒悬浮到一 定体 积 .提 纯 的病 毒冻 存于--2