PDF《茯苓摇瓶液体发酵复合药性培养基及其化学成分研究》

四川省科技厅项目(2006J13-150) 作者简介:李羿(1969―) ,男,四川成都人,副教授,博士,从事发酵中药及中药品种、品质的研究. Tel: (028)68289198

13688305707 E-mail: lychengdu@yahoo.com.cn *通讯作者 万德光 E-mail: wandeguang@163.com 网络出版时间:2012-07-06 网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120706.1715.007.html 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第43 卷第8期2012 年8月・1520・ 药用真菌培养基和培养条件对其发酵水平有重 要影响.在营养培养基中添加单味中药材组成的培 养基称为药性培养基,药性培养基中的中药活性成 分将通过对药用真菌的生长代谢的调控影响其发 酵,药性培养基对药用真菌液体发酵影响的研究已 成为热点[3-7] .笔者曾研究了薏苡仁、黄芪等

9 种单 味中药材对茯苓摇瓶液体发酵的影响,结果表明黄 芪、金银花和丹参对茯苓菌丝体生长有抑制作用, 而薏苡仁、甘草、淡竹叶、桑叶、灵芝和枸杞子则 对茯苓的菌丝体生长有促进作用[8] .在营养培养基 中添加

2 味或

2 味以上中药材组成的培养基称为复 合药性培养基.本实验将

2 味中药材粉末添加到营 养培养基中组成复合药性培养基,研究其对茯苓摇 瓶液体发酵的影响.同时,对在复合药性培养基中 经摇瓶液体发酵后获得的复合药性发酵茯苓的化学 成分进行了研究.

1 仪器与材料 超净工作台 (苏净集团安泰公司) ;

全温振荡器 (哈尔滨东联电子技术开发有限公司) ;

Sartorius BP121S 型电子天平;

Beckman J2―HS 型离心机;

氨基酸自动分析仪;

灰分测定装置;

FW

177 型粉碎 机;

纯水仪(Human Power III) ;

GGX―9 火焰原子 吸收光谱仪(北京地质仪器厂) ;

WOS―20 型无油 空气压缩机(天津天伟医疗器械有限公司) . 茯苓菌株 P6 冷冻甘油菌由成都医学院药学院 生药教研室筛选保存. 酵母浸膏、蛋白胨为 Oxoid 产品;

葡萄糖化学 对照品(批号 08336-9501,中国药品生物制品检定 所) ;

苯酚 (重蒸) ;

K2HPO

4、 MgSO4・7H2O、 NaOH、 葡萄糖、盐酸、氯仿、丁醇、乙醇、丙酮、乙醚、 硝酸和过氧化氢等试剂均采用国产分析纯;

微量元 素测定用水为 18.3 M? 高纯水. 基础培养基:葡萄糖

20 g,酵母浸膏

4 g,蛋白 胨5g, K2HPO4

1 g, MgSO4・7H2O 0.5 g, 初始 pH 5.5, 蒸馏水

1 L. 营养培养基:葡萄糖

20 g,酵母浸膏 3.5 g,蛋 白胨 4.5 g,K2HPO4

1 g,MgSO4・7H2O 0.5 g,初始 pH 5.5,蒸馏水

1 L. 薏苡仁 Coicis Semen、桑叶 Mori Folum、甘草 Glycyrrhizae Radix 、 灵芝Ganoderma 、 淡竹叶Lophatheri Folum 和枸杞子 Lycii Fructus 均购于成 都杏林大药房, 经成都中医药大学万德光教授鉴定, 均符合《中国药典》2010 年版规定;

粉碎过

60 目筛,

60 ℃烘干至恒定质量后装入有塞瓶中, 贴上标 签,放入干燥器内备用.

2 方法与结果 2.1 菌种液制备 将50 mL 基础培养基装入

250 mL 三角瓶,按0.5%比例接种冷冻甘油菌,25 ℃摇瓶振荡培养

2 d 作为摇瓶液体发酵菌种备用. 2.2 摇瓶液体发酵 将制备的薏苡仁等中药材粉末按一定量加入到 发酵基础培养基中,1.05 kg/cm2 ,121.3 ℃灭菌

20 min.冷却至室温,按6%比例接入菌种液,培养温 度26 ℃,摇瓶装量

60 mL(250 mL 三角瓶) ,150 r/min 摇瓶振荡培养

7 d. 2.3 检测指标 2.3.1 胞外多糖纯化与称量 胞外多糖纯化与称量 参照文献方法[9] . 2.3.2 菌丝体制备与称量 发酵液