PDF《Bacmid qBac-I 简要手册》

Bacmid qBac-I 简要手册 V1.

4.2 2018.10 本产品包含 qBac-I(Bacmid DNA,每次转染使用 40ng [5?L],浓度 8ng/?L) Control plasmid*(阳性对照转移载体质粒 DNA,每次转染使用 300ng [3?L],浓度 100ng/?L) 使用者需要准备 1. 转染试剂 2. 昆虫细胞培养基(加100UI/ml 氨苄青霉素和 100UI/ml 链霉素) 3. 六孔板或 35mm 细胞培养皿,每孔(皿)铺1x106 个Sf9 细胞(2mL) 4. 带有目的基因片段的转移载体质粒**(每次转染需要 300ng) 程序***(以Promega FuGENE HD Transfection Reagent 转染试剂为例,其他转染试剂 请参照具体使用说明) A) 准备转染 DNA 混合物 1. 向无菌的 1.5mL 离心管中加入

95 ?L ddH2O(或无血清培养基) ,再向离心管 中加入 5?L Promega FuGENE HD Transfection Reagent 转染试剂,充分混匀. 2. 向无菌的 1.5mL 离心管中加入

92 ?L ddH2O(或无血清培养基) ,再向离心管 中加入 5?L Bacmid DNA,再向离心管中加入

3 ?L 转移载体质粒 DNA,充分混匀. 3. 将(1)中溶液加入(2)中,充分混匀,室温静置 20-30 min. B) 将DNA 混合物加到细胞中 1. 将DNA 混合物逐滴均匀加入细胞培养皿中. 2. 放置 28℃培养箱中静置培养 4-6 天. C) 收获 P0 代病毒 1. 收集培养皿中的培养基(上清) ,4℃避光保存.此即为 P0 代病毒. D) 表达蛋白 1. 用20-200 ?L P0 代病毒加到铺好细胞的六孔板的一个孔中, 28℃静置培养

4 天, 收集培养皿中的培养基(上清) ,300 X g 离心 5min 移除细胞碎片,获得 P1 代病毒, 测定滴度(方法自选) .4℃避光保存. 2. 用P1 代病毒以 3MOI 感染 Sf9 细胞,至感染后 4-5 天收集蛋白. * Control plasmid 带有 p10 启动子控制的 EGFP 基因,转染

48 小时后出现的绿色荧光细 胞代表病毒重组成功. ** 转移载体质粒可选用我公司产品,或选用 pOET、pBac、pTriEx、pIEx 等兼容性质粒. *** 上述程序仅为推荐程序,使用者可以根据以往经验进行调整. 陕西杆粒生物科技有限公司 公司

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