PDF《产品特点》

产品简介 由于食品成分复杂,除含有多种原料组分外,还含有盐、糖、油、色素等食品添加剂, 此外,加工过程中的煎、炸、煮、烤等工艺也会使原料中的DNA会受到不同程度的损坏.

因此,从加工食品中提取DNA比从原材料中提取DNA相对的困难. 本试剂盒采用独特的缓冲液系统,特别适合从深加工食品中提取DNA.无需酚/氯仿抽 提,使用安全快捷方便,可最大限度去除深加工食品中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂 质. 使用本试剂盒提取的深加工食品DNA可适用于各种检测,包括PCR、荧光定量PCR实验. 产品特点 简单快速:2 h左右(不包括预处理时间)即可获得高质量的DNA. 超纯:获得的DNA纯度高,可直接用于PCR、荧光定量PCR等分子生物学实验. 得率高:从100 mg样品中即可获得足够用于PCR检测的DNA量;

注意事项:请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项. 1.酱油、番茄酱等样品应进行预处理,以达到好的提取效果.特殊样品请咨询本公司后进 行提取. 2.如果缓冲液GMO1中出现沉淀,可在37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用. 3.所有离心步骤均为使用台式离心机,室温下离心. 操作步骤 针对酱油含有较多焦糖色素、番茄酱pH值过低等不利于DNA提取的特点,在正式进入试剂 盒提取之前,应对提取样品进行预处理. 酱油样品预处理:取酱油30 ml,加入60 ml无水乙醇混匀,置冰箱(-20℃)放置10 min后, 10,000 rpm离心10 min.弃上清,在沉淀中加入30 ml 0.1M Tris.Cl(pH8.0)溶液,用力摇匀, 全部转移至100 ml烧杯中,于磁力搅拌器上搅拌2 h.分装至1.5 ml离心管中,12,000 rpm离心10 min.弃上清,加入1.5 ml 0.1M Tris.Cl(pH8.0)溶液,涡旋振荡至块状打散,12,000 rpm 离心10 min.弃上清,沉淀中的焦糖色素及盐等小分子已全部去除,可直接用于DNA提取. 番茄酱样品预处理:取番茄酱液态加工样品1.5 ml于离心管中,10,000 rpm离心15 min.弃 上清,用1 ml 0.1M Tris.Cl溶液洗涤样品3次,振荡混匀,10,000 rpm离心15 min.弃上清, 留沉淀待用. 1. 称取研碎的深加工食品100 mg或上述预处理的样品,加500 ?l缓冲液GMO1和20 ?l的Proteinase K (20 mg/ml),旋涡振荡1 min. 2. 56℃孵育1 h.孵育过程中每15 min振荡一次. 3. 加入200 ?l缓冲液GMO2,充分混匀,涡旋振荡1 min.室温静置10 min. 4. 12,000 rpm(~13,400*g )离心5 min,将上清转移至新的离心管中. 5. 向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇,充分混匀.(例如500 ?l的水相溶液加350 ?l异 丙醇),12,000 rpm(~13,400*g )离心3 min,弃上清,保留沉淀(此步沉淀可能看不 见). 注意:加异丙醇沉淀后,弃上清应小心,防止把DNA倒出. 6. 可选步骤:在步骤5加异丙醇之前,向上清液中加入1 μl Carrier RNA(酱油、番茄酱必 加),再加入异丙醇.(Carrier RNA目录号:RT416-02) 7. 加入

700 ?l 70%乙醇,涡旋振荡5 sec,12,000 rpm(~13,400*g )离心2 min,弃上清. 8. 重复操作步骤7. 注意:弃上清应小心,防止把DNA倒出. 9. 开盖倒置,室温5-10 min,彻底晾干残余的乙醇. 注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(PCR、荧光定量PCR等)实验. 10. 加入20-50 μl洗脱缓冲液TE,旋涡振荡1 min,最终得到DNA溶液. DNA提取效果检测 由于深加工食品中DNA含量非常低,普通琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计等方法都不 能很准确的检测,一般用PCR或荧光定量PCR来检测DNA提取效果. 如采用TIANGEN 公司2*Taq PCR MasterMix (目录号:KT201)进行DNA提取效果检测 (Lectin基因、Zein基因、Patatin基因检测): 反应体系 PCR反应体系的建立,20 μl体系如下: 组成成份 体积 2*Taq PCR MasterMix