PDF《HPLC法测定消咳喘糖浆中槲皮素和杜鹃素的含量》

HPLC法测定消咳喘糖浆中槲皮素和杜鹃素的含量 马洪波1 ,王启迪2 ,冯文军1 ( 1.

哈药集团中药二厂 ,黑龙江 哈尔滨 150078;

2. 哈药集团三精制药有限公司 ,黑龙江 哈尔滨 150010) 消咳喘糖浆对治疗慢性支气管炎、感冒咳嗽有 显著的疗效 ,由满山红 (杜鹃花科植物兴安杜鹃 ) Rhododendron dahuricum L. 的干燥叶提取制成 , 含有槲皮素、杜鹃素等黄酮类有效成分.文献 [1~

3 ] 报 道采用 HPLC法使用不同的流动相、不同检测波长 分别测定其含量 ,方法较繁琐. 本实验探讨使用一种 流动相、流速梯度法、同一检测波长的条件下 ,测定 槲皮素和杜鹃素的含量 ,得到满意的分离效果 ,方法 简便、易行 ,定量准确、快速 ,节省试剂、缩短分析时 间 ,提高了检测效率.

1 仪器与试药 Waters 2695高效液相色谱仪 (自动进样器、恒 温柱箱 ) , Waters 2996二极管阵列检测器 , Millen- nium

32 色谱工作站;

槲皮素、杜鹃素对照品 (中国药 品生物制品检定所 ,批号分别为 0081-9905 、 0850- 200203) ;

甲醇、乙腈均为色谱纯 ,磷酸为分析纯;

消 咳喘糖浆 (哈药集团中药二厂 )

2 方法与结果 2.

1 色谱条件: Waters Nova-pak C18色谱柱 (

150 mm* 3.

9 mm, 4μ m);

流动相: 乙腈 - 水-磷酸 (

200 ∶

300 ∶ 1);

检测波长:

297 nm;

柱温:

25 ℃;

流量梯度 法:

0 ~

12 min, 0.

2 mL /min;

12 ~

13 min, 0.

2 ~ 0.

9 m L /min;

13~

19 min, 0.

9 mL /min;

19~

20 min, 0.

9 ~ 0.

2 mL /min;

20 ~

25 min, 0.

2 m L /min (

20 ~

25 min不记录色谱图 ). 2.

2 对照品溶液的制备: 精密称取槲皮素对照品 1.

20 mg 和杜鹃素对照品 0.

67 mg置于

50 mL量 瓶中 ,加甲醇溶解 ,并加至刻度 ,制成混合对照品溶 液 (槲皮素质量浓度为 0.

024 0 mg /mL,杜鹃素质 量浓度为 0.

013 4 mg /m L). 2.

3 供试品溶液的制备: 精密量取消咳喘糖浆 3.

0 m L,置25 mL量瓶中 ,加甲醇

20 mL,超声

5 min,放冷,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 0. 45μ m滤膜滤过 ,即得. 2.

4 线性关系考察: 取槲皮素和杜鹃素混合对照品 溶液进样 2, 6, 10, 14, 18,

22 μL,以进样量为横坐 标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程 ,槲 皮素: Y=

6 596 601.

5 X -

66 442. 6, r= 0.

999 8, 线性 范围: 0.

050 4~ 0.

554 4 μ g;

杜 鹃素: Y =

4 121 862.

5 X -

23 465. 8,r= 0.

999 8,线性范围: 0.

026 8 ~ 0.

294 8μ g. 2.

5 稳定性试验: 取消咳喘糖浆供试品溶液分别在

0 、

2 、

4 、

6 、

8 h 进样 ,测定峰面积 ,计算 ,槲皮素 RSD 为0.

35 % ,杜鹃素 RSD为0.

79 %.表明供试品溶液 在8h内稳定. 2.

6 精密度试验: 取消咳喘糖浆供试品溶液 ,进样 5次 ,每次 10μL,测定峰面积 ,计算 ,槲皮素 RSD为0.

08 % ;

杜鹃素 RSD为0.

73 %. 2.

7 重现性试验: 取消咳喘糖浆 (批号: 020506) ,按 供试品溶液的制备方法制成 5份供试品溶液 ,进样 测定峰面积 ,计算 ,槲皮素 RSD为0.

83 % ;

杜鹃素 RSD为0.

91 %. 2.

8 加样回收率: 取批号为 020506的消咳喘糖浆 , 精密量取 1.

5 、 2.

0 、 2.

5 mL各两份 ,精密加入混合 对照品溶液 12.

0 、 10.

0 、 8.

0 mL,按供试品溶液的制 备方法制成溶液 ,进样 ,测定质量浓度 ,计算 ,槲皮素 平均回收率为 99.

39 % , RSD为1.

2 % ;

杜鹃素平均 回收率为 100.