PDF《生物化学实验室规则》

(1)目的和要求 (2)内容与原理 (3)主要仪器及试剂配制 (4)操作方法与实验步骤 (5)结果与讨论 定性实验报告中的实验名称和目的要求是针对该次实验课的全部内容而必须达到的 目的和要求.在完成实验报告时,可以按照实验内容分别写原理、操作方法、结果与讨论 等.原理部分应简述基本原理.操作方法(或步骤)可以流程简图的方式或自行设计的表 格来表示.结果与讨论包括实验结果及观察现象的小结、对实验课遇到的问题和思考题进 行探讨以及对实验的改进意见等. 定量实验报告中,目的和要求、原理以及操作方法部分应简单扼要的叙述,但是对于 实验条件(试剂配制及仪器)和操作的关键环节必须写清楚.对于实验结果部分,应根据 实验课的要求将一定实验条件下获得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比,并 尽量总结成各种

图表,如原始数据及其处理的表格、标准曲线图以及比较实验组与对照组 实验结果的

图表等. 另外, 还应针对实验结果进行必要的说明和分析. 讨论部分可以包括: 关于实验方法(或操作技术)和有关实验的一些问题,如实验的正常结果和异常现象以及 思考题进行探讨,对于实验设计的认识、体会和建议,对实验课的改进意见等.

3 碳水化合物 实验一 还原糖和总糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法

一、目的 掌握还原糖和总糖测定的基本原理,学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计 的使用.

二、原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法.还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单 糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是 非还原糖.利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对 没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求 出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计) . 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕 红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸.在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比 关系,利用分光光度计,在540nm 波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出 样品中还原糖和总糖的含量. 由于多糖水解为单糖时, 每断裂一个糖苷键需加入一分子水, 所以在计算多糖含量时应乘以 0.9. COOH OH NO2 O2N 3,5-二硝基水杨酸(黄色) 还原糖 COOH OH NH2 O2N 加热碱性糖酸3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色) + +

三、实验材料、主要仪器和试剂 1. 实验材料 小麦面粉;

精密 pH 试纸. 2. 主要仪器 (1)具塞玻璃刻度试管:20mL

11 (2)大离心管:50mL

2 (3)烧杯:100mL

1 (4)三角瓶:100mL

1 4 (5)容量瓶:100mL

3 (6)刻度吸管:1mL 1;

2mL 2;

10mL

1 (7)恒温水浴锅 (8)沸水浴 (9)离心机 (10)扭力天平 (11)分光光度计 3. 试剂 (1)1mg/mL 葡萄糖标准液 准确称取 80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖 100mg, 置于小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 转移到 100mL 容量瓶中,用蒸馏水定容至 100mL,混匀,4℃冰箱中保存备用. (2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂 将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液, 加到 500mL 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液 中,再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至 1000mL,贮于棕 色瓶中备用. (3)碘-碘化钾溶液:称取 5g 碘和 10g 碘化钾,溶于 100mL 蒸馏水中. (4)酚酞指示剂:称取 0.1g 酚酞,溶于 250mL 70%乙醇中. (5)6M HCl 和6M NaOH 各100mL.