PDF《中田分 舛—。 。j_》

3 病毒形态粗纯 化 的病 毒 经磷钨 酸负染 后, 在 电镜 下可 见球 状病 毒粒 子(图1),大小 约为55nm. 健康蟹经 同样 的纯 化 方法 , 检测 不到病 毒粒子 .

1 2 图l病毒 粒子的形 态Fi g l Mo t p h o l o g , /o f t h e v i r i o n 图2病毒棱 酸的 电诛 图谱

1 .标 准分 子量 2病 毒棱 酸F2E] e c t m p ] ~ r e t l c p a t m o f nu de i e a ―d ol t h e v i ~o n

2 .

4 病毒接 酸 抽提 的病 毒核酸 经1%琼脂 糖 电泳后 , 如图2所示 . 病 毒基 因组分 节段 , 可见t2个 片段 . 电泳 图谱 为3131412型 . 以标准分 子量 为标准 . 通过 回归分析 , 计算出的各 片段的 分子量 大小如表 2所示 .病 毒核酸 的总分 子量约 为20kb.根 据 电泳 图谱的特 点,推测第

5 、 第 9条带 都含有1个分 子 以上 的分 子质 量相似 且迁移率 相似 的核酸 分子 , 因此分 离到 的病 毒 的基 因组 至少有l4个 节段 .病毒 核酸

2 0 L(

1 . 5u g ) 变性后 . 加1LR Na s e(

1 0mg l mL) ,

3 7℃保温

1 h后,电泳检测 发现 病毒 核酸被 降解 ;

而用 DNa s e I

2 L(

1 u / L) ,

3 7℃ 处理

1 h , 病 毒核 酸的 电泳 图谱不变.推测病毒核酸为dsRNA. -

8 维普资讯 http://www.cqvip.com 中国病毒学第15卷

3 讨论自从

1 9

9 5年 中华绒螯蟹 颤抖病 暴 发以来 , 人们对该病的发生原因进行了研究分析,有观点认为 是 由细菌 感染 引起, 但 至今 未见细菌分 离、回感成功 的 报道 ;

也 有观点 认为是非 生物 因 素引起 的j,但缺乏科学 的实验 依据.陆 宏达等(1999)通过电镜 观察和回感试 验,认为 一种小核糖 核酸病 毒 的感 染 可导 致 中华绒螫 蟹表现 出颤 抖症状_8j.笔者从表现出颤抖症状的病蟹中初步 分 离纯 化 了一种 不同的病毒 , 从病 毒粒子的形 态、大小、核酸特点来看.该病毒类似于呼 腑 孤病 毒, 从病毒的基 因组 的分 节段 情况分析,该病毒与水生 呼 肠孤 病毒 属 的特 点不 一致,基固组 的I4个 片段代 替 了水 生呼肠孤病 毒属的11个 基 因组 片段 . 电泳 图谱 为3131412衰2捕毒 基因 组各 节段的分 子量Ta b l e

2 M o l e c uL a r we i g h t

0 f ge n o m i ~ … 【 s vi r u ~ N b 病 毒核 酿分 子量(kb)总分 子量36731I

2 79

1 76

1 56

1 2

9 1

01 0.

92 0

7 5

0 6

4

0、

41 0,

2 8

2 0

5 0 ( 2倍计 算分 子量) 型. 也 不同于 从地中海 蟹(Carcinusme d i t e r a n e u s ) 分 离到 呼 肠孤 病毒的核 酸 电泳 图谱(115/6)L2J,同样在分类 上 可能属 于一种新 的病 毒 .水产 养殖 中, 疾 病表 现 非常 复杂,往往表现 出一 症 多病或 一病 多症 , 从 回感 结果分析, 笔 者所 分离的病 毒 肯定 是 中华绒 螯 蟹颤 抖病的病 原之一,且表现 出强烈 的致病性 .温度 与该病 的发生 有密切 的关 系,

3 2℃ 明显 加速病 势的 发展, 这 同生 产上

6 ~9月份颤抖 病流行 暴发 的气 象条 件 一致 .给蟹 注 射病 毒、 投喂 病蟹 组织、病蟹组织匀浆 以及从 口壳边缘 渗入病 毒,都可 以引起感染 , 说 明该病 毒可 以食 下 传染 、 创伤 传染 , 也可以从体表 渗入 传染. 该病毒对锯 齿 华溪蟹也表 现 出致 病性 , 由此 可 以推 测锯 齿华 溪蟹 可能 是 颤抖 病的 传染源之 一 .从寄 生组织来 看, 该 病毒 可以在性 腺 中寄 生, 但 是否 可 以引起 垂直 传染还有待于进一步研 究.参考文献【1】Ka n c h a n a p h u 皿P、Wo n g t e e r a ~ u p a y a c ,S i t l d i l o k r a t a n a N ,e t a l E x p e r i me ma l t r a n s mi s s i o n o f w h i t e s p o t s y n d r o me v i r u ~ ( ws s v)[ r o m c r a b st o~z i mp …