PDF《简明中文手册》

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3 &

5 实时定量 PCR 仪 简明中文手册 第一部分:绝对定量 (Software v1.

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2 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪Applied Biosystems? QuantStudio?

3 & 5实时定量PCR仪1. 双击桌面图标 ,开启QuantStudio Design & Analysis Software,或从开始菜 单>All Programs > Applied Biosystems > QuantStudio Design & Analysis Software> QuantStudio Design & Analysis Software开启软件. 2. 进入主界面后,点击"Create New Experiment" . 3. 在"Properties"界面设置实验属性: a. 输入实验的名称;

b. 选择仪器型号;

c. 选择仪器的 Block(加热模块)类型;

d. 选择实验类型为"Standard Curve";

e. 选择实验试剂类型:TaqMan 探针法选择"TaqMan Reagents",SYBR 染料 法选择"SYBR Green Reagents",其他选择"Other";

f. 选择运行模式(Run mode):普通试剂选择"Standard";

快速试剂可选择 "Fast". 4. 点击"Next "进入"Method"界面,设置实验的运行程序. 简明中文操作指南

3 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪4.1 (可选)设置梯度反应温度:

1 单击 (Advanced Settings) ;

2 勾选 VeriFlex,

3 然后更改Block上相应区域的反应温度,相邻区域温度差异不能超过 5℃ . 注:梯度反应温度设置仅限于96孔加热模块.QuantStudio

3 可设置3个梯度反应 温度;

上图为QuantStudio 5示例图,可设置6个梯度反应温度. 4.2 (可选)设置暂停程序:

1 点击 图标,

2 勾选Pause,

3 设置暂停前的反应循 环数(Pause after cycles) ,以及暂停后的温度(Pausing Temperature,范围: 简明中文操作指南

4 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪4~99.9℃) . 5. 进入"Plate " 界面,点击"Advanced Setup " ,

1 设置待测基因名称(Target);

2 设置样品名称(Sample). 5.1 在"Targets"内点击"Add" ,添加待测基因.在"Target Name"中编辑基因名 称;

"Reporter"和"Quencher"中选择所标记的荧光基团及淬灭基团.对于 "Quencher"的选择,如果是MGB探针,请选择NFQ-MGB;

如果是TAMRA探 简明中文操作指南

5 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪针,请选择TAMRA;

如果是其他形式的无荧光淬灭基团则选择"None" . 5.2 在"Samples"内点击"Add" ,添加待测样品.在"Sample Name"中编辑样品名 称. 5.3 利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔,然后勾选左侧的基因及样本,同时在"Task" 选项中指定该反应孔的类型(S 代表标准品,U 代表未知样本,N 代表阴性对照) . 5.4 设置标准曲线:利用鼠标单选或拖拽以选择反应孔(一般情况下,每个浓度梯度设 置至少三个复孔) ,而后勾选左侧的基因(Target)和样本(Sample) ,在"Task" 选项中选择S,并在"Quantity"中输入标准品量.重复上述操作,完成标准曲线其 简明中文操作指南

6 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪 他浓度点的设置(建议设置至少5个浓度梯度) . 6. 点击"Next "进入"Run"界面,点击"Save"保存文件,然后点击"START RUN"开始运行. 7. 实验运行结束后,进入"Results"界面,点击右上角的"Analyze"按钮分析数据 并查看扩增结果. 7.1 更改扩增曲线显示方式:单击"Show Plot Setting" ,在"Graph Type"中可更改 扩增曲线的显示方式(Log 或Linear 图) . 简明中文操作指南

7 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪7.2 设置基线和阈值线:软件默认使用"Auto"功能自动设定基线和阈值线. 7.2.1 查看阈值线或基线:单击"Show Plot Setting" ,选择需要查看的基因,将"Show: Threshold"及"Show: Baseline"前的选项打勾.扩增曲线图上会出现相应的基线 范围和阈值线. 7.2.2 手动设置基线和阈值线:去掉"Auto"的勾选,然后输入阈值,或用鼠标拖动阈值 线和基线进行手动调节.设置好后,点击"Analyze"分析结果. 简明中文操作指南

8 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪7.3 查看标准曲线(Standard Curve) :通过单击 a "Show Plot Setting" ,更改 "Target"来选择想要查看的基因.Eff%代表扩增效率.R2 值代表标准曲线的数据 点与回归曲线的接近程度,建议在 0.99 以上. 简明中文操作指南

9 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪7.4 对于 SYBR Green 实验,可以选择"Melt Curve Plot" ,查看熔解曲线. 7.5 查看"QC Summary"结果:反应孔可能存在异常情况时,会出现黄色三角提示, 数字

1 代表有一种情况,2 代表有两种情况,以此类推.详细信息及解决方案可以 在"Flag Details"中查看. 简明中文操作指南

10 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪8. 数据导出:在"Export"界面下根据需要导出数据. 简明中文操作指南

11 Applied Biosystems?QuantStudio 3/5 实时定量 PCR 仪 遍布全球的技术支持服务 我们在全球

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